Ette Serolojik Muayene

Prespitan halka testi


Amaç: Bir et ürünün etiketinde belirtilen kasaplık hayvan etleri dışında başka hayvan etinin katılıp katılmadığının tespiti amacıyla yapılır.
Prensip: Antijen ile prespitan serumu ufak tüplerde karıştırmaksızın üst üste koyarak, iki sıvı faz arasında maksimum yarım saatte gri-beyaz halkanın oluşup oluşmadığını tespit etmek.
Numune alma: Steril bıçakla etin iç kısmından yağsız yerinden 30 g numune alınır. Dış kısım diğer etlerle muamele etmiş olabileceğinden uygun değildir.
Alınan numune bistüri ile ince ince kesilir ve havanda iyice ezilir.
30 g et 50-100ml steril distile su veya %0,085 lik NaCl ile 2 defa yıkanır, süzülür
(Salam ve sosis için 50 ml, sucuk için 60 ml %0,085 lik NaCl kullanılır)
Süzüntüden sonra süzgeç kağıdında kalan et örneği başka bir havana alınır, üzerine 50-100 steril distile su ilave edilir, üzeri folyo ile kapatılır.

Oda ısısında 3 saat veya buzdolabında 1 gece bekletilir. 80 oC nin üzerinde pişirilmiş sucuklarda 2 gün bekletilir. Süre sonunda ekstraksiyon sıvısı filtrasyonla süzülerek berrak hale getirilir.
Ekstaksiyon sıvısının pH sı 6-7 arasında olmalıdır. Asidik olduğu durumlarda %1 sodyum karbonatla ayarlanır. Süzüntü sonu elde edilen ektrakt bizim analizde kullanacağımız kısmı oluşturur.
Testin yapılışı: Test edilecek örnek ile antiserumlar oda ısısına gelene kadar bekletilir.
Bu amaçla at, tavuk, domuz ve sığır antiserumları kullanılır.
Yukarıda hazırlanan ektrakttan 0.5 ml alınır durhem tüplerine konur.
Üzerine pastör pipeti ile 0.5 ml pozitif serum örneğinden alınır extract üzerine yavaşça bırakılır.
37 oC de 10-30 dk bekletilir
Değerlendirme: Süre sonunda bu iki sıvının birleşme yerinde oluşan beyaz-gri renkli halka pozitif olarak kabul edilir.
Dikkat edilmesi gereken nokta:

*Bu metotla filogenetik olarak birbirne yakın olan hayvan türlerinin ayrımı mümkün değildir. At eti ile eşek eti, koyun ve keçi serumları aynı titrede reaksiyon verdiklerinden ayrılamazlar. Bu metotla çift tırnaklı, tek tırnaklı ve poli tırnaklı ayrımı söz konusudur.

*Prespitan halka testi, taze etlerde yapıldığı gibi dondurulmuş, kurutulmuş, dumanlanmış, tuzlanmış ve hatta kokmuş etlerde de yapılabilir. Sadece 80 oC nin altında ısı işlemine maruz kalmış olması gereklidir.

*80 oC nin üzerinde ısı işlemi görmüş etlerde bu test uygulanamaz.Yüksek ısı proteinleri koagule ve denatüre ettiğinden pişirilmiş etlerde bu yöntem uygulanmaz.* Yüksek ısı işlemi görmüş ürünlerde ise daha spesifik yöntemler, ELISA ve PCR uygulanabilir.
Kaynak: TS 1069/Mart1997. Et ve et mamülleri-Laboratuar analiz metotları-Genel
Kaynak: TS 979/Ocak 1992. Salam