Etin Histolojik Muayenesi

Histolojik Muayene

Amaç: Bir et ürününde kasaplık gövde etleri, yağ ve müsaade edilen miktardaki bağ dokusu dışında diğer doku ve organların katılıp katılmadığının tespit edilmesi amacıyla yapılır.
Prensip: Bir et ürün önce formolde 1 gün tespit edilir, dereceli alkol ve ksilen serilerinden geçirildikten sonra parafin bloklara gömülür. Mikrotom yardımı ile parafin bloklardan kesit alınarak lam üzerine konur, lamelle kapatılır. Hematoksilen eozin ya da trikrom boya yöntemleri ile bu lameller boyanır ve daha sonra mikrostopta incelenir.
Numune alma: Genel şüpheli et ürünü 2-3 cm lik kare şeklinde kesilir ve doku takip kaseti içine konur.

Histolojik Doku Takip Cetveli:

Pazartesi Numune %10 luk formolde 1 gece bekletilir

Salı 9.00-17.00 Akarsuda bekletme
17.00-9.0 %70 Alkolde 1 gece

Çarşamba 9.00-11.00 %80 Alkolde bekletme (2h)
11.00-14.00 %96 Alkolde bekletme (3h)
14.00-9.00 %100 Alkolde 1 gece bekletme

Perşembe 9.00-10.00 Ksilen I de bekletme (1h)
10.00-11.00 Ksilen II de bekletme (1h)
11.00-12.00 60 oC de Parafin I de bekletme (2h)
12.00-14.00 60 oC de Parafin II de bekletme (2h)
14.00-15.00 Parafin blokların gömülmesi (30dk)
Blok dibe iyice yapışsın yüzeyde kalmasın
15.00-17.00 Deepfrizde bekletme (Kesit alana kadar deepfrezde saklanır. Alınmayacaksa oda ısısında saklanabilir.)

Cuma 9.00-11.00 Kesit alma işlemleri (45 oC su banyosunu) 11.00-12.00 Lama yapıştırılan kesitlerin parafinleri 60 oC lik
etüvde 1 h de eritilir.
14.00-17.00 Boyama işlemleri (Trikrom boyama, HxE boyama)
Pazartesi Mikroskobik değerlendirme ve Rapor yazımı


Boyaların hazırlanması
Crossman's Trichrome

Solutions

Solution A

Acid fuchsin

0.3 g

Orange G

2.0 g

Acetic acid

1.0 mL
Water
100
mL
Thymol
0.06
g (a small crystal)
Solution B

Phosphomolybdic acid

1.0 g
Water
100 mL
Solution C
either or

Anilin blue

2.0 g

Light green SF

1.0 g
Acetic acid

2.0 mL

Acetic acid

1.0 mL
Water

100 mL
Water

100 mL

Solution D

Acetic acid

1.0 mL
Water

100 mL

Hematoksilen Eozin Boyama

Boya maddeleri: Eosin Y (Carlo Erba 446634)
Hemotoxylin cryst (K26696402)

Boyama Yöntemleri
1. Crossman Tricroma Boyama

Ksilol 1 10dk
Ksilol 2 10dk
%100 alkol (etanol) 2dk
%96 alkol 2dk
% 80 alkol 2dk
%50 alkol 2dk
Distile su 2dk
Boya A 1dk
Distile su 2dk
Boya B kollajenlerin rengi gidene kadar
Distile su 2dk
Boya C 5dk
Distile su 2dk
Boya D diferensiye olana kadar
Distile su 2dk
%50 alkol 2dk
% 80 alkol 2dk
%96 alkol 2dk
%100 alkol (etanol) 5dk
Ksilol 1 10dk
Ksilol 2 10dk

Ksilolden çıkınca ıslakken lam üzerine cam bagetle1 damla entellan damlatılır. Lamel 30 derece açı ile üzerine kapatılır. Üzerine kurşun ağırlık konur.
Entellanı küçük bir kaba koy büyük şişede donabilir.

Tüm bu solusyonlar şalelerin içinde yer alır.

Değerlendirme:

Nuclei
-
black

Erythrocytes
-
yellow

Cytoplasm
-
red

Collagen
-
blue or green

2. Hematoksilen Eozin Boyama

Ksilen I 5dk (İlk ksilen parafini eritmek için)
Ksilen II 5dk
%100 alkol 5dk
%96 alkol 5dk
%80 alkol 5dk
Distile su 5dk (suyu sakın unutma yoksa boya almaz)
Hematoxylin 10dk
Çeşme suyunda yıkama 2dk
Asit-alkol daldırma
NaCo3 daldırma
Eozin 2-3dk
%80 alkol daldırıp hemen çıkart
%96 alkol daldırıp hemen çıkart
%100 alkol daldırıp hemen çıkart
Alkolu kurut Fön makinası ya da açık havada
Ksilen I Daldırma (Parlaklık vermek için)
Ksilen II Daldırma
Ksilenden çıkar çıkmaz ıslakken lamele 1 damla entellan damlar lamı yapıştır.